農(nóng)作物在人類(lèi)生活中*的一部分，為人類(lèi)飲食健康提供很大的幫助，特點(diǎn)是花生與豆類(lèi)為人類(lèi)提供大量能量需求，下面為用凱氏定氮儀測(cè)定花生粕和豆類(lèi)粕粗蛋白含案例提供分享。

免水凱氏定氮儀

用于測(cè)定有機(jī)物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí)，則可用此法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過(guò)程通常稱(chēng)為“消化”。但是，這個(gè)反應(yīng)進(jìn)行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或*以提高反應(yīng)液的沸點(diǎn)，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。

消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結(jié)合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)鹽酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來(lái)的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量可計(jì)算出待測(cè)物中的總氮量。蛋白質(zhì)的含氮量為16%，即1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)，用凱氏定氮法測(cè)出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 器材

凱氏定氮儀 、石墨消解儀、300ml凱氏燒瓶 4個(gè)； 移液管；錐形瓶； 試管； 小玻璃珠

1.2 試劑

98%濃硫酸分析純；

35％*溶液；

2％硼酸溶液；

標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(0.01mol／L)。 

粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。

樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。

2 實(shí)驗(yàn)步驟

消化：

取4個(gè)300ml凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào),各加1顆玻璃珠，在1號(hào)及2號(hào)瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時(shí)應(yīng)直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號(hào)及4號(hào)瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號(hào)瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對(duì)照。在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化。在消化開(kāi)始時(shí)應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開(kāi)始分解并放出SO2白煙后，適當(dāng)加強(qiáng)火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。

蒸餾器的洗滌：

用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀，在蒸汽發(fā)生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑，用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶，繼續(xù)蒸汽洗滌2分鐘，觀察錐形瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。移走錐形瓶，停止加熱，打開(kāi)夾子。

蒸餾：

設(shè)定取30％的*溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml稀釋液，設(shè)定蒸餾時(shí)間5分鐘，開(kāi)始蒸餾。氨氣進(jìn)入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續(xù)下一個(gè)蒸餾操作。待樣品和對(duì)照均蒸餾完畢后，同時(shí)進(jìn)行滴定。

滴定：

用0.01mol／L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點(diǎn)。 

3 結(jié)果計(jì)算

其中： A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)； B為滴定對(duì)照液用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)； C為所取樣品溶液的ml數(shù)。

針對(duì)凱式定氮儀有相關(guān)案例如果你的實(shí)驗(yàn)室剛需要可以與我們一塊討論、分享，關(guān)注格丹納還可以了解以下幾種方法哦。

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